DNA亲子鉴定之甲基化敏感的单核苷酸引物延长法

发布日期:2021-07-10浏览量:97

单碱基延长手艺在SNP的检测中已获患有普遍应用。Gonzalgo和Jones (1997)首次将此手艺应用于特定CpG位点甲基化状况的定量检测。甲基化敏感的单核苷酸引物延长法(methylation-sensitive single nucleotide primer extension,MS-SNuPE)的基来历根基理是基于重亚硫酸盐对未甲基化的胞嘧啶的化学修饰。模板DNA经重亚硫酸盐转化后,在特定的CpG位点将人为造成一个新的 “SNP”,即[mC/U]。针对该位点设计PCR引物和一条3′端紧邻该位点的单碱基延长引物。通常PCR反馈完毕后,去除PCR引物及过多的dNTP,插手单碱基延长引物及喷射性同位素或荧光标识表记标帜的ddCTP/ddTTP或ddGTP/ddATP,终极两种碱基喷射性同位素或荧光强度的比值即批示了该位点的甲基化水平。因为该手艺在SNP的检测中已胜利开辟出了雷同SNPsteam如许的高通量自动化检测平台,因此该手艺有望在法医学检测中获得普遍应用。还有一些学者采用反相高效液相色谱手艺(EI-Maarri et a1.,2002)或基质辅佐激光解离质谱阐明手艺 (Tost et al.,2003)对MS-SNuPE产物进行检测,可实现特定CpG位点甲基化水平的准确定量。因为该要领所需模板DNA量较少,有能够应用雷同白腊包埋组织等能够存在降解的基因组DNA的检测。该要领的倒霉的处地点于,经重亚硫酸盐转化后,PCR引物及单碱基延长引物的设计相对付庞大,尤为是在对多个位点同时进行检测时。

更多详情:http://www.qinzijianding.cn

本文网址:http://www.591dna.com/11226.html

相关标签:

相关文章: