DNA亲子鉴定之DNA直接测序手艺

发布日期:2021-07-10浏览量:105

PCR直接测定序列按照Sanger的双脱氧结尾终止法道理,详细的阐明要领品种有多种,但大体上的步调根本一致,包括DNA提取、扩增、测序模板的纯化以及测序反馈等等,差别的是标识表记标帜物及显示序列测定后果的要领。
直接测序法采用的标识表记标帜物有二类。一是经典的测序法采用的喷射性同位素,测序图谱用喷射自显影显带。另外一种是荧光染料,是较新的标识表记标帜手艺,荧光染料受激光激起,释出特定波长的光谱,寄托自动测序仪检测并记载靶DNA序列。直接测序还可以采用银染法,无须标识表记标帜物,双脱氧核苷酸终止链DNA片断颠末电泳分散后直接用银染显带、判读序列。在上述要领中,同位素标识表记标帜法活络度比力高,但有喷射性污染。由于标识表记标帜物32 P半衰期短、操纵庞大、测验周期长,理论应用遭到必然限定;银染色要领活络度有限,搡作精度请求高,难度较大,不容易把握。荧光染料标识表记标帜直接测序手艺寄托专门的序列测定仪器,自动化水平高,阐明后果精确,制止了操纵过程当中人为因素的影响,检测活络度濒临同位素标识表记标帜水平。今朝,全自动测序仪进行基因序列阐明曾经是一种通常手艺,也是法医学DNA序列多态性阐明的主要手艺伎俩。

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