DNA亲子鉴定之甲基化特同性PCR

发布日期:2021-07-11浏览量:106

甲基化特同性PCR (methylation-specific PCR,MSP)乜是一种基于重亚硫酸酸盐转化的检测要领,雷同于SNP检测要领中的等位基因特同性PCR,由Herman等(1996)所创立。与Methylight要领差别的是,前者对[mC/U]的检测采用的是特同性探针,而在MSP中,设计的是针对[mC/U]的特同性引物。每回样品进行两个PCR反馈,一套引物对宜于甲基化DNA经重亚硫酸盐转化后的序列,另外一套引物对应于未甲基化DNA经重亚硫酸盐转化后的序列。PCR产物常通常琼脂糖凝胶或非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳便可对后果进行判断。也可采用公用探针以提供检测旗帜暗号。事实上,为了包管MSP的特同性,MSP的引物设计要包管在引物连系区域至少包罗两个潜在的CpG位点,且此中一个要位于或濒临引物的3 7端。Wang等(2006)借助于基因表达系列阐明手艺(Serial analysis of gene expression,SAGE)的高通量,联结MSP创立了一种DNA甲基化的定量阐明要领( MSP-SAGE),该要领在5%~100%甲基化范畴内具备精良的线性关系。Kristensen等(2008)对基于MSP的DNA甲基化定量检测要领进行了改进。他们将MSP与高辨别消融曲线阐明联结应用,制止了定量检测过程当中对荧光探针的运用,简化了MSP反馈体系设计,该要领被称之为SMART-MSP。该要领与MethyLight的检测后果具备很好的一致性,可在0.1%~100%范畴内对DNA甲基化水平进行准确定量,并具备较高通量。

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