亲子鉴定之Chelex-100提取DNA

发布日期:2021-07-11浏览量:99

Chelex-100提取DNA的要领最先由Singer - Sam等1989年报导,Walsh等(1991)对该法在法医物证检材中的应用进行了零碎的研讨。今朝Chelex - 100提取DNA的要领已成为一种通常手艺,普遍应用于生命科学各个领域。

1、道理:Chelex - 100是以成对的亚氨基二乙酸盐离子为吸附因子的苯乙烯与二乙基苯的共聚物,它对高价金属离子有很高的亲和力和螯分工用。在低离子强度、碱性及煮沸的前提下,可使细胞膜决裂,并使卵白量变性,DNA游离。检材及其基质中含有大量的核酸酶和金属离子,Chelex - 100螯合吸附了金属离子后,可能按捺核酸酶对DNA的消化作用,防止DNA在煮沸过程当中的降解作用,同时在高温、低离子强度前提下,另有催化DNA开释的作用。如许的处置过程既到达了分散提取DNA份子的目的,同时除去了一些对扩增反馈有按捺作用的因子(如重金属离子)。

2、根本操纵步调及要领:Chelex - 100提取法普遍应用于微量血液、组织块、精斑、毛根、唾液斑、骨骼及牙齿等物证检材的DNA提取,提取的DNA非常适适用作PCR模板,本节以微量血液为例,其余检材右关内容将在第4节叙说。 根本操纵步调: (一)取血液l~5出,插手1.5ml离心管中,插手Iml纯水,室温下震荡混匀15—30min。 (二)10000一12000r/min离心2~3min,弃上清。须要时用纯水洗涤1—2次; (三)室温下12000r/min离心3min,弃去上清,留下积淀。 (四)在离心管中插手200pl悬浮好的5010 Chelex - 100溶液,在56℃水浴中温浴30min以上,震荡溶液5~ 10s。 (五)100 aC温浴8min,掏出后高速震荡溶液5~10s。 (六)室温下12000r/min离心3min。上清即为用于PCR反馈的DNA样品。4。20C保留备用。 注重事项: (一)本法仅适用于PCR反馈模板制备,提取后短期以内运用。 (二)操纵中振荡步调需求充实。 (三)灭菌去离子水破碎红细胞后,离心积淀仍很红,可再加Iml灭菌去离子水充实振荡、离心,直至上清液无色。 (四)可适量延伸56℃温浴时间。 (五)基因组DNA是在上清液中,通常情况下在501ul扩增体系中插手1。51ul样品足以知足PCR反馈的需求,详细加几个取决于肇端检材量。 (六)Chelex - 100运用终浓度通常是5%, pH值应在10。11之间,若是pH值有改动应试用,不该人为调整Chelex - 100的pH值。 (七)Chelex - 100放置后会积淀,运用前必需混匀,用Chelex - 100提取的DNA模板如PC置时间长或从一个试验室携带到另外一个试验室测验,扩增前应混匀后再离心,取上清液。PCR反馈体系内绝对不克不及含有Chelex - 100,不然Mg“会被螯合,使PCR扩增失败。 (八)Chelex - 100法提取DNA煮沸很关键,温度、时间要足够。更多详情:http://www.qinzijianding.cn

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