DNA鉴定之唾液(斑)DNA提取

发布日期:2021-07-12浏览量:120

唾液(斑)中含有脱落的口腔上皮细胞,唾液(斑)上皮细胞DNA的提取可采用有机溶剂提取法,Chelex - 100提取法和磷酸缓冲液法,详细操纵以下:

1.有机提取法:

(1)将适当标本剪碎置离心管中,插手Iml生理盐水轻轻混匀冲刷细胞,5000r/min离J心10min,弃上清后再反复一遍。(2)在积淀的上皮细胞中插手400t/l TES(15mmol/L Tris - HCl pH8.0,15mmol/L EDTA pH8.0, 15mmol/L NaCl),lOOoC温浴lOmin,冷却至室温再加10% SDS,lOmg/ml PK,使其终浓度别离为1%,lOOtLg/ml,37℃消化留宿。(3)等体积饱和酚和氯仿各抽提2次,上清用2.5倍体积冰无水乙醇积淀,1000r/min离心lOmin,积淀晾干,灭菌去离子水消融备用(当样品中DNA含量很少时,若是用TE缓冲液消融,此中的EDTA浓渡太高,按捺TaqDNA聚合酶活性,以是此时倡议用无菌水消融DNA)。2.Chelex - 100提取法:(1)将适当斑迹剪碎,插手装有200V1 5% Chelex溶液的离心管中。(2)特lOmg/ml卵白酶K2阻插手管中,轻轻混匀。高速震荡溶液5~10s,必然要使积淀悬浮起来。(3)在56℃水浴中温浴20min,高速震荡溶液5~10s。(4)100℃煮沸8min,高速震荡溶液5~10s。(5)在室温下15000r/min离心2min。上清用于PCR反馈。4℃保留备用或-20℃贮存。3.磷酸盐缓冲液法:(1)将适当斑迹剪碎,置于装有Iml PBS缓冲液中,1500r/min离心5min,积淀细胞,弃上清。(2)用50—300µl钾缓冲液悬起细胞积淀。55℃消化1h(裂解细胞,开释DNA)。(3) 95℃水浴10min,灭活卵白酶K,- 20℃保留备用。(二)口腔拭子中DNA的提取1.将其放入装有200til的5%c1.elex - 100的1.5ml离心管内,轻轻搅动,使细胞脱落。2.56℃温Y15~30min,高速振荡5~10S。3.100℃煮沸8min后当即高速振荡5~10s,15000r/min离心2min。上清便可用于进行PCR反馈。注重事项:唾液斑检材DNA提取,检材插手量不容易量化,应连系检材详细情况调整。倡议以下:1.烟蒂中可否提掏出DNA与烟蒂是否沾有口腔脱藩上皮细胞有关,也与吸烟者吸烟时口含烟蒂几个的习气有关,并非一切烟蒂均能提掏出足够量的染色体DNA用于测验,DNA的提取必须用沾有唾液或口唇上皮细胞的那部分检材。不克不及将整个烟蒂全部投入,不然过大的载领会影响DNA的提取。烟蒂检材普通剪取0.3~0.5cm高的烟蒂,将外层纸剪碎放入1.5ml离心管中;2.口腔拭子是外洋成立DNA数据库首选的检材,立法时它属体外标本。因而,用口腔拭子进行PCR分型不少见。取单根拭子头部的1/3~1/4装入1.5ml离心管中或用牙签刮拭口腔粘膜。3.口香糖检材取1/2摆布,用无菌铰剪尽能够剪碎,放入1.5ml离心管,如含土壤等,先用无菌水洗洁净。4.咬痕唾液斑检材,纱布或棉拭子擦拭咬痕部位。用纱布提取的剪取0.1~0.2cm2,棉拭子取头部1/2外层部分。更多详情:http://www.qinzijianding.cn

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