DNA亲子鉴定之有机溶剂提取法提取骨、牙组织的DNA

发布日期:2021-07-12浏览量:105

骨骼、牙齿因为有外部硬组织的庇护,因而能够抵挡外界环境的影响,DNA不容易被降解,在软组织凋射或炭化的情况下,从软骨、骨骼、牙齿等硬组织中提取DNA是惟一的选择。肌体软组织高度凋射肌肉变黑,以至液化的情况下,从软骨组织仍能够提取到DNA扩增分型的模板,以是软骨组织是抱负的检材。对付骨骼、牙齿样本,宜选骨髓、牙髓,其次选择干骺端、其余骨松质丰硕的部位,末了选择骨密质部分。

表露在田野现场的骨骼、牙齿标本起重要进行荡涤事情。将标本用蒸馏水冲刷洁净、枯燥,用灭菌细沙纸磨去骨外层部分,并在紫外灯下映照杀菌1~ 2h,以制止微生物或外源DNA的污染,再进行如下步调。 有机溶剂提取法:1.较奇怪的骨骼(1)钻取骨粉(胃松质10~20mg,骨密质75~100mg)或取牙髓,别离用冷蒸馏水、乙醇、乙醚各浸泡15min;(2)待彻底枯燥后加TES(15mmol/L Tris-HCl pH8.0,15mmol/L EDTA pH8.0,15mmol/LNaCl) 400µl,10% SDS 40µl,10mg/ml卵白酶K 4µl,混匀。37℃温浴留宿。(3)饱和酚、氯仿抽说起冷乙醇积淀,操纵同血液DNA提取。应该注重的是此要领对较奇怪骨、牙的DNA提取成效较好,对陈腐骨、牙检材提取成效欠安。2.陈腐骨骼(1)取5g骨粉插手40ml 0.5mol/L EDTA pH8.0,4aC混匀24~48h。5000r/min离心15min,弃上清。(2)用40ml提取缓冲液(0.5mol/L EDTA,0.5%蔗糖pH8.0)脱钙。5000r/min离心15min,弃上清。(3)插手提取缓冲液使终体系达7ml,再插手10mg/ml卵白酶K 200µl,37℃孵育12h,追加10mg/ml卵白酶K100µl,37℃再消化12h。(4)酚、氯仿抽说起冷乙醇积淀,操纵同血液DNA提取。须要时用centricon柱层析法浓缩。更多详情:http://www.qinzijianding.cn

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