亲子鉴定之软组织的DNA提取

发布日期:2021-07-12浏览量:90

人体组织是提取染色体DNA抱负的质料,也是常见的物证检材。碎尸案对现场提取的尸块常需作统一认定,强奸致孕案,对引产胎儿组织作DNA阐明认订婚权关系等。常用组织脏器检材挨次有脑、肺、肌肉、皮肤、淋凑趣等。肝脾等脏器中DNA含量较高,但肝脾中各类核酸酶很活跃,因而,DNA极易分解,往往不容易获得大份子的DNA,不作为首选脏器质料。组织块送检前的保留很首要,为了削减核酸被降解,获得组织检材后应尽快冷冻保留,常规在- 200C摆布便可,有前提的可在液氮中速冻,如前提不容许,可将组织放70%乙醇暂保留,注重不克不及用福尔马林固定保留的要领。针对差别前提、环境下的组织质料,取材要领各有差别。普通情况下,取深部肌肉,出格是筋膜包裹的肌肉成效较好。须保留足够的组织检材以备复检,普通取50~200壳为好。脑组织DNA含量较多,奇怪脑组织是提取DNA抱负质料。碎尸检材,准则上甚么部位奇怪取甚么组织,应剖开碎尸部分,尽能够提取深部肌肉。人流的胚胎组织,须分散母体与胚胎部分,因比重差别用生理盐水浸泡,可将二者分隔。绒毛组织的DNA代表胚胎组织的DNA。法医物证测验送检样品多是奇怪组织,也多是高度凋射的组织块,或是保留多年的甲醛固定组织,白腊包埋组织。组织DNA的提取,准则上与血液等检材沟通,分述以下:

(一)奇怪组织或冷冻组织DNA的提取要领:要领1(1)组织DNA的提取需先将组织用灭菌去离子水、乙醇冲刷灭菌。(2)取10~50克组织切碎后匀浆,加TES 2~4ml、10% SDS 0.2~0.4ml、10mg/ml PK 20~40µl,55℃保温5~8h,直到彻底消化。(3)而后用酚氯仿萃取DNA,步调同前。注重事项:(1)匀浆,研磨尽管能破碎大块组织,但同时也会因匀浆过程当中机器剪切力使DNA遭到毁伤。因而应尽能够柔和操纵,缩短匀浆时间。(2)这类要领主要用于DNA - RFLP阐明的测验手艺。要领2(1)将组织于- 20℃以下冷冻,用手术刀片刮取l~5mg放人1.5ml离心管中。(2)加5%Chelex - 100 200µl,10mg/ml的PK 2~3µl,于56℃保温6~8h,实在时时振荡,直到组织彻底消化。(3)高速震荡5~10s,在100 ℃水浴中煮沸8min。(4)高速震荡5~10s,15000r/min离心3min,上清液4℃保留备用或- 20℃贮存。注重事项:Chdex - 100法提取DNA关键是尽能够取检材奇怪部分,可是量不宜太多。提取过程当中56℃孵化,保温时间要足够,振荡要充实。要领3(1)取组织0.1g剪碎放于1.5ml离心管内,加0.5ml细胞裂解液(10mmoI/L Tris-HClpH8.0,15mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA - Na2 pH8.0,0.40/0 SDS),10µl卵白酶K(10mg/ml),56℃消化1h,100℃煮沸10min,旋涡震荡Imin。(2) 5000r/min离心1min,取上清液3~5ul作PCR模板。(二)高度凋射组织的DNA提取:要领1(1)取凋射相对付较轻的组织0.5g放于1.5ml离心管内,加0.4ml细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl pH8.0,15mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA. 2Na pH8.0,0.4% SDS)、20V1卵白酶K ( lOmg/ml);(2) 56℃消化2h,酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)抽提3次,氯仿-异戊醇(24:1)抽提1次;(3)加2倍体积乙醇和1/10体积3mol/L NaAc于- 20℃积淀留宿,15000r/min离心15min:(4)去上清,加5% Chelex100µl,旋涡震荡Imin,100 0C煮沸lOmin;(5) 12000r/min离心Imin,取3~5µl上清作PCR。要领2(1)刮取- 20℃以下冷冻的凋射组织10~20g放于10ml离心管内,加8~10ml 0.9%的NaCl,800r/min离心3min;弃上清。(2)加TES 4.5ml、10% SDS Iml、10mg/ml的PK100µl,56℃保温2~5h,直到彻底消化。(3)用酚氯仿萃取DNA,步调同前。更多详情:http://www.qinzijianding.cn

本文网址:http://www.591dna.com/11253.html

相关标签:

相关文章: