DNA亲子鉴定之Chelex提取法提起骨、牙组织的DNA

发布日期:2021-07-12浏览量:114

骨骼、牙齿因为有外部硬组织的庇护,因而能够抵挡外界环境的影响,DNA不容易被降解,在软组织凋射或炭化的情况下,从软骨、骨骼、牙齿等硬组织中提取DNA是惟一的选择。肌体软组织高度凋射肌肉变黑,以至液化的情况下,从软骨组织仍能够提取到DNA扩增分型的模板,以是软骨组织是抱负的检材。对付骨骼、牙齿样本,宜选骨髓、牙髓,其次选择干骺端、其余骨松质丰硕的部位,末了选择骨密质部分。
表露在田野现场的骨骼、牙齿标本起重要进行荡涤事情。将标本用蒸馏水冲刷洁净、枯燥,用灭菌细沙纸磨去骨外层部分,并在紫外灯下映照杀菌1~ 2h,以制止微生物或外源DNA的污染,再进行如下步调。
Chelex提取法:

1.较奇怪的检材

凋射尸身、碎尸等受多种因素影响DNA降解,因而可同时取骨、牙等检材。

(1)取量1~5mg加5% Chelex - 100 200µl于56℃水浴中温浴8h;(2)高速震荡5~10s,在100℃水浴中温浴8min;(3)高速震荡溶液5~10s,在室温下15000r/min离心2min,上清液4℃保留备用或-20℃贮存。2.陈腐骨骼(1)在1.5ml的离心管中插手2mg骨粉,用0.5ml灭菌去离子水荡涤三次,弃去上清。(2)在离小管中插手悬浮好的5%Chelex溶液200µl,10µg/µl卵白酶K 4µl。高速震荡溶液5~10s。(3)在56℃水浴中温浴8h,高速震荡溶液5~10s。(4)在100 ℃水浴中煮沸8min,高速震荡溶液5~10s,在室温下15000r/min离心2min。取上清液用等体积氯仿:异戊醇(24:1)提纯三次,上清液4℃保留备用或- 20℃贮存。更多详情:http://www.qinzijianding.cn

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