DNA亲子鉴定之毛发的DNA提取要领

发布日期:2021-07-13浏览量:130

毛发分毛根、毛干、毛尖三部分。毛根含有染色体DNA,但天然脱落的毛发根部含染色体DNA量少少。毛干部分含有线粒体DNA,跟着比年来测序手艺的发展,经由过程毛干mtDNA测序作个体辨认曾经成为较常见的手艺。

(一)毛根DNA提取1.有机提取法:(1)取带毛根的毛发1根用乙醚洗涤去油脂,乙醇清洁外表,枯燥。(2)将单个发根剪入1.5ml离心管中,插手100µl TES(100mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,10mmol/L Tris - HCl pH8.0)、10% SDS 10µl和10mg/ml卵白酶K 1µl,混匀,55℃水浴2h或37℃温浴留宿。(3)用等体积饱和酚、酚/氯仿、氯仿各抽提一次。(4)加1/10体积3mol/L醋酸钠(pH5.2),2倍体积预冷无水乙醇,混匀,积淀DNA。10000r/min离心10min,弃去上清。(5)真空枯燥,10µl消毒去离子水消融DNA备用。2.Chelex - 100提取法将0.5cm发根剪入1.5ml离心管中,灭菌水、乙醇别离荡涤两次,晾干后插手5﹪Chelex - 100 50µl~100µl,如下步调同Chelex - 100提取血液DNA。3.直接煮沸法将单个毛根剪入1.5ml离心管中,灭菌水、乙醇别离荡涤两次,晾干后插手50µl~100µl灭菌水,滚水煮10min,4℃备用。(二)毛干mtDNA提取1.取lcm长毛干,用乙醇擦拭,放人1.5ml离心管中。2.灭菌水、无水乙醇别离浸泡两次,每次10min。3.晾干后如入64µl TES(10mol/L Tris pH8.0,10mmol/L EDTA,100mmol/L NaCl),10﹪SDS 20µl,10mg/ml卵白酶K8µl,1mmol/L DTT 8µl,混匀,37℃温浴消化留宿。4.待毛干消化彻底后,等体积酚氯仿抽提,搜集上清备用。更多详情:http://www.qinzijianding.cn

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